四、DCR?520主要功效及機(jī)制
1、斑馬魚(yú)舒緩功效(總運(yùn)動(dòng)距離)試驗(yàn)
冰醋酸雖然屬于弱酸,但有強(qiáng)烈的刺透性和腐蝕性。皮膚接觸冰醋酸會(huì)有刺痛和灼傷的感覺(jué)。選擇游泳能力尚未發(fā)育完全的斑馬魚(yú),利用冰乙酸刺激斑馬魚(yú)引起較大面積和較長(zhǎng)時(shí)間的炎性疼痛,導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)軌跡越多,疼痛越嚴(yán)重。應(yīng)用行為分析儀檢測(cè)斑馬魚(yú)的總運(yùn)動(dòng)距離,評(píng)價(jià)樣品是否具有舒緩功效。樣品DCR?520的測(cè)試結(jié)果如下:
該樣品功效實(shí)驗(yàn)表型圖和柱形圖,如下圖 1 和圖 2 所示:
觀察發(fā)現(xiàn),樣品 DCR ?520 的總運(yùn)動(dòng)距離與模型對(duì)照組相比,明顯減少,揭示了該樣品具有舒緩功效,在 0.01%和 0.2%濃度下舒緩功效分別為 40%和 90%,具體表現(xiàn)為神經(jīng)舒緩功效。
2、DCR ?520對(duì)神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏挠绊?/strong>
背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)是感覺(jué)傳導(dǎo)的初級(jí)神經(jīng)元,具有傳輸和調(diào)節(jié)機(jī)體感覺(jué),接收和傳導(dǎo)傷害性感受的功能?,F(xiàn)在已成為離體細(xì)胞水平神經(jīng)病理疼痛治療的重要模型,在疼痛機(jī)制中的作用和疼痛治療等領(lǐng)域成為研究熱點(diǎn)。在背根神經(jīng)節(jié)上存在多種離子通道,與疼痛等疾病相關(guān)的是鈉離子通道。神經(jīng)損傷后,電壓門控鈉離子通道活性改變,使得神經(jīng)元興奮性增加,產(chǎn)生異常的自發(fā)性放電。本試驗(yàn)采用手動(dòng)膜片鉗技術(shù)來(lái)研究受試物DCR ?520對(duì)SD大鼠DRG神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢桓鲄?shù)的影響,從而進(jìn)一步探討初級(jí)神經(jīng)元在疼痛發(fā)生機(jī)制中的作用。測(cè)試結(jié)果如下:
結(jié)果顯示,樣品 DCR ?520 在濃度 0.003125%和 1.2mg/mL下,可顯著降低神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位釋放頻率,讓神經(jīng)細(xì)胞在單位時(shí)間的興奮頻次下降。其中,濃度在0.003125%時(shí)的抑制率為56.25%,濃度在1.2mg/mL時(shí)抑制率為93.75%。
3、辣椒素受體(TRPV1)蛋白含量檢測(cè)試驗(yàn)
本試驗(yàn)的主要目的是基于辣椒素刺激角質(zhì)形成細(xì)胞檢測(cè)TRPV1蛋白含量來(lái)評(píng)價(jià)待測(cè)物通過(guò)抑制TRPV1而達(dá)到舒緩的功效。TRPV1為門控離子通道受體,也稱為辣椒素受體,是一種熱敏感受體,辣椒素等作用后通過(guò)激活TRPV1,進(jìn)一步導(dǎo)致Ca2+內(nèi)流。待測(cè)物作用后TRPV1被抑制,細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低,從而可以說(shuō)明待測(cè)物通過(guò)抑制TRPV1而達(dá)舒緩的功效。
樣品DCR?520的測(cè)試結(jié)果如下:
基于角質(zhì)形成細(xì)胞,與對(duì)照組相比,樣品DCR ?520 在0.0078%(m/v)濃度下,辣椒素受體(TRPV1)蛋白含量均顯著下降,抑制率為26.53%,說(shuō)明樣品在該濃度下,通過(guò)抑制辣椒素受體(TRPV1)蛋白表達(dá),而達(dá)到舒緩功效。
4、人體辣椒堿斑貼試驗(yàn)
該實(shí)驗(yàn)分為A、B兩組,A組為空白對(duì)照組,將10滴0.01%的辣椒堿滴于斑貼試紙上;B組為DCR ?520試驗(yàn)組,將10滴配制好的含0.01%辣椒堿和3%DCR ?520的溶液滴于斑貼試紙上,將A、B兩組同時(shí)貼于左右胳膊上,30min后撕下斑貼,結(jié)果如下:
結(jié)果顯示,A組出現(xiàn)明顯的刺痛,灼燒和泛紅,而B(niǎo)組未見(jiàn)不良反應(yīng)。證實(shí)了樣品DCR ?520可以顯著提高皮膚的耐受度。